無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法

　　1.工作室應(yīng)矮小、平整，面積只需4米2左右，高2.2―2.3米，內(nèi)部裝修應(yīng)平整、光滑，無凹凸不平或棱角等，四壁及屋頂應(yīng)用不透水之材質(zhì)，便于擦洗及殺菌。

　　2.室內(nèi)采光面積大，從室外應(yīng)能看到室內(nèi)情況。

　　3.為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設(shè)緩沖走廊，走廊旁再設(shè)緩沖間，其面積可小于無菌室。

　　4.無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設(shè)有日光燈及供消毒空氣用紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺以1米為宜，其電源開關(guān)均應(yīng)設(shè)在室外。

　　5.無菌室與緩沖間進(jìn)出口應(yīng)設(shè)拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門應(yīng)錯開，以免空氣對流造成污染。

　　6.無菌室的使用與管理

　　(1)無菌室應(yīng)保持清潔整齊，室內(nèi)存放必須的檢驗(yàn)用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、玻璃鉛筆等。&不要放與檢測無關(guān)的物品

　　(2) 室內(nèi)檢驗(yàn)用具及凳桌等保持固定位置，不隨便移動。

　　(3)每2―3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作臺、門、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣，紫外燈殺菌半小時

　　(4)定期檢查室內(nèi)空氣無菌狀況，細(xì)菌數(shù)應(yīng)控制在10個以下，發(fā)現(xiàn)不符合要求時，應(yīng)立即徹底消毒滅菌。/無菌室無菌程度的測定方法：取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養(yǎng)基平板各3個(平板直徑均9厘米)，置無菌室各工作位置上，開蓋曝露半小時，然后倒置進(jìn)行培養(yǎng)，測細(xì)菌總數(shù)應(yīng)置37℃溫箱培養(yǎng)48小時;測霉菌數(shù)則應(yīng)置27℃溫箱培養(yǎng)5天。細(xì)菌`霉菌總數(shù)均不得超過10個為。

　　(5)無菌室殺菌前，應(yīng)將所有物品置于操作之部位(待檢物例外)，然后打開紫外燈殺菌30分鐘，時間一到，關(guān)閉紫外燈待用

　　(6)進(jìn)入無菌室前，必須于緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。

　　(7) 操作應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)定進(jìn)行，操作中少說話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無菌狀態(tài)。

　　無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法

　　微生物檢驗(yàn)用器材及場所必須進(jìn)行滅菌或消毒處理，不同的對象采用不同的處理方法。

　　1. 高壓蒸汽滅菌:工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內(nèi)，一般采用121℃滅菌半小時,當(dāng)然不同的培養(yǎng)基有不同的要求,應(yīng)分別處理

　　2. 火焰滅菌： 接種針、接種環(huán)等可直接火焰滅菌

　　3. 高溫干燥滅菌： 各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃滅菌2小時

　　4. 一 般消毒:無菌室內(nèi)的凳、工作臺、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進(jìn)行滅菌，必須用其他方法進(jìn)行消毒處理，采用2%石炭酸或來蘇兒水溶液擦拭消毒，工作人員的手也用此法進(jìn)行消毒

　　5. 空氣的消毒： 開啟紫外燈照射30―60分鐘 即可。

　　無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法

　　1. 先進(jìn)行無菌室空間的消毒，開啟紫外燈30―60分鐘

　　2. 檢驗(yàn)用的有關(guān)器材， 搬入無菌室前必須分別進(jìn)會滅菌消毒

　　3. 操作人員必須將手清洗消毒，穿戴好無菌工作衣、帽和鞋，才能進(jìn)入無菌室

　　4. 進(jìn)入無菌室后再一次消毒手部，然后才進(jìn)行檢驗(yàn)操作

　　無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法

　　1. 動作要輕，不能太快，以免攪動空氣增加污染;玻璃器皿也應(yīng)輕取輕放，以免破損污染環(huán)境

　　2. 操作應(yīng)在近火焰區(qū)進(jìn)行。

　　3. 接種環(huán)、接種針等金屬器材使用前后均需灼燒，灼燒時先通過內(nèi)焰，使殘物烘干后再灼燒滅菌

　　4. 使用吸管時，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必須用洗耳球操作。

　　5. 觀察平板時不好 開蓋，如欲沾取菌落檢查時，必需靠近火焰區(qū)操作，平皿蓋也不能 大開，而是上下蓋適當(dāng)開縫。

　　6.進(jìn)行可疑致病菌涂片染色時，應(yīng)使用夾子夾持玻片，切勿用手直接拿玻片，以免造成污染，用過的玻片也應(yīng)置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗滌。

　　7. 工作結(jié)束，收拾好工作臺上的樣品及器材，用消毒液擦拭工作臺。

　　無菌室管理規(guī)定

　　1. 無菌室地面、臺面、其它表面每日晨擦拭1次。超凈臺每日晨75%酒精擦拭超凈臺消毒，每次使用前準(zhǔn)備好物品，將超凈臺紫外滅菌30分鐘后方可使用。

　　2. 從室外帶入無菌室內(nèi)的所有物品表面要用75%酒精或紫外照射預(yù)先消毒。無菌操作前75%酒精消毒手掌、手背。整個操作嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作。

　　3. 每人次使用后，臺內(nèi)物品全部取出并用消毒液噴灑消毒用后的物品歸位，垃圾帶出無菌室。連續(xù)使用時間超過1小時，請預(yù)約登記。

　　4. 無菌室內(nèi)電腦生物反應(yīng)器，閑人免用。使用后將防塵罩罩上，防止紫外直接照射。

　　5. 無菌室內(nèi)定期消毒滅菌：噴灑3-5%石炭酸溶液并用2-3%來蘇水擦洗桌面、凳子，無菌室內(nèi)噴霧消毒后，紫外滅菌30分。每周一次。

　　6. 無菌室內(nèi)無菌狀況定期檢測：滅菌后的接種室內(nèi)桌上和桌下各放一套培養(yǎng)基平皿，暴露15分鐘，蓋上，37℃培養(yǎng)24小時，每個平皿的菌落≤4，則認(rèn)為效果良好，否則需延長照射時間或加強(qiáng)其它措施。每周一次。

　　7. 滅菌后物品放在指定位置，注明滅菌日期，高壓滅菌物品可存放7-14天，過期不能再用，需重新包裝滅菌。

　　8. 所有準(zhǔn)備進(jìn)入無菌室工作的人員必需首先了解細(xì)胞培養(yǎng)的基本要求和操作規(guī)范，并進(jìn)行必要的培訓(xùn)。

　　9. 進(jìn)入無菌室前需提交相關(guān)實(shí)驗(yàn)計劃：包括使用細(xì)胞種類、數(shù)量;所需試劑種類，試劑是否有毒;培養(yǎng)液種類;實(shí)驗(yàn)時間等。不歡迎沒有計劃和計劃不可行的人員進(jìn)行漫無目的的測試。

　　10. 每一個研究人員的培養(yǎng)細(xì)胞;細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)的位置;培養(yǎng)液;消化液;消毒物品;消毒物品擺放位置等都固定化，并作好標(biāo)記。禁止交叉亂用，亂放，造成可能的污染擴(kuò)大，所有研究人員未經(jīng)本人許可不得使用他人的物品和位置。

　　11. 通用性的液體(如培養(yǎng)液、消化液、生理鹽水、鈣溶液)由管理人員統(tǒng)一配制，專人管理，便于進(jìn)行質(zhì)量控制和研究人員的計費(fèi)。研究人員根據(jù)需要申領(lǐng)，并作好標(biāo)記，做到專人專物，嚴(yán)禁未經(jīng)他人許可亂用他人物品。培養(yǎng)液只有在用完后可再申領(lǐng)新瓶，防止浪費(fèi)。

　　12. 研究生實(shí)驗(yàn)用物品領(lǐng)取登記后自己保存管理。實(shí)驗(yàn)前泡酸、包裝和消毒，實(shí)驗(yàn)后及時洗刷、干燥、歸位。